基因的化学合成

基因的化学合成即人工合成寡核甘酸片段,通过PCR拼接的方法,获得所需要的基因表达序列或者启动子等功能性元件片段。基因化学合成使合成任何基因序列成为可能。...

miRNA的表达载体构建

通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA,并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。...

siRNA的细胞转染及筛选

siRNA(Small interfering RNA)是21-25核苷酸的小分子RNA,由Dicer酶加工双链RNA而成。siRNA与体内多种酶类结合形成RNA诱导的沉默复合物(RISC),从而激发与之互补的目标mRNA的降解。天然的RNAi现...

目的基因ORF克隆

ORF cloning 实验原理 ORF 克隆是指从样本组织或细胞中抽提总 RNA,反转录,设计合成特异性引物后,通过 RT-PCR 扩增获 得目的基因的 DNA 序列,获得编码全长蛋白质序列的 DNA 序列:即从起...

shRNA载体构建及筛选

该载体模拟miRNA的加工,表达出来的shRNA进入RISC沉默复合物的效率要比RNA聚合酶III型启动子表达的shRNA高倍十倍,抑制效率更好,且可以和EGP协调表达,方便观察转染效率。...

RNAi病毒包装及筛选

利用慢病毒或腺病毒表达shRNA,一方面可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞,提高shRNA导入细胞的效率,另一方面病毒介导可延长RNAi的时间,尤其慢病毒...

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