高效液相色谱法(HPLC)


高效液相色谱法(HPLC)

chromatography

 

 

实验原理

 

以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法(HPLC)。其基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱,经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器,由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色信号或进行数据处理而得到分析结果。

高效液相色谱仪(HPLC)用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上,采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。高效液相色谱仪(HPLC)适于溶解后能制成溶液的样品,不受样品挥发性和热稳定性的限制,对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测。用途广泛,占有机物的80%。

高效液相色谱(HPLC)优点

 

  1. 高压:液相色谱以液体作为流动相(称为载液),液体流经色谱柱时,受到的阻力较大,为了能迅速地通过色谱柱,必须对载液施加高压。在现代液体色谱中供液压力和进样压力都很高,一般可达到15~30MPa,甚至可达MPa

  2. 高速:高效液相色谱的流速较之经典液体色谱快得多,一般可达l—10mL/min, 个别可高达100mL/min以上,这已近似于气相色谱的流速。 高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多,一般少于1h 。

  3. 高效:气相色谱的分离效能很高,高效液相色谱的柱效则更高,一般约可达 60000理论塔板/米;近来研究出许多新型固定相,使分离效率大大提高。

  4. 高灵敏度:紫外检测器的最小检测量可达毫微克数量级(10-9 g);荧光检测器的灵敏度可达10-11g。高效液相色谱的高灵敏度还表现在所需试样很少;微升数量级的样品就足以进行全分析。

 

实验结果展示