微滴式数字PCR系统


  • 原理简介



微滴式数字PCR(Droplet Digital PCR,ddPCR)系统在传统的PCR扩增前对样本进行微滴化处理,将含有核酸分子的反应体系分成数万个含有或不含待检测核酸靶分子的纳升级微滴。经PCR扩增后,对每个微滴的荧光信号进行逐一分析,有荧光信号的微滴判读为1,没有荧光信号的微滴判读为0,根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度。

 

  • 操作流程



 

  • 仪器设备


 

  • 技术特征

能够检测含量极低的核酸序列

微滴化步骤可实现对靶标DNA/RNA的富集,灵敏度可达单个核酸分子,检测限低至0.001%,可实现痕量核酸的高灵敏度检测,适用于DNA定量分析、肿瘤突变分析和基因分型等。  无需标准品,即可对靶标分子起始量进行绝对定量

能够有效区分浓度差异微小的样品

更好的准确度、精密度和重复性,可用于精确测定靶基因的相对表达、基因拷贝数变异分析等。

对PCR抑制剂的容忍度更高,适合基质复杂样品的检测

终点PCR检测,不依赖Ct值,不依赖扩增效率,能克服PCR抑制剂的影响;适合动物血样、FFPE组织、粪便、尿液、唾液、水样、土壤、植物等复杂样品中DNA的绝对定量。对PCR抑制剂的容忍度更高,适合基质复杂样品的检测
 

  • 应用分类


 

服务案例之   遗传性胸腺瘤的基因检测



1、临床发现




临床医生发现同一家庭出现两个胸腺瘤患者,且符合以下特征,考虑为首次发现的遗传性胸腺瘤家系:

一个家族同时出现两个患胸腺瘤的病人;
Ⅲ2患者在27岁患病;
罕见肿瘤;
无外环境风险因素。



2、基因检测与验证



采集患两个患者的血样进行外显子测序,分析验证结果显示二者均存在SETD2基因突变:



3、SETD2在肿瘤中的突变
 



 


服务案例之    溶瘤病毒VG001在小鼠CRC中的抗肿瘤作用

1、研究背景:

在现有免疫疗法中,免疫检查点抑制剂PD-1单抗在MSI型结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的临床治疗中效果显著,但占总数约85%的MSS型CRC仍然缺乏有效的治疗方法。近期兴起的溶瘤病毒疗法作为一类对肿瘤细胞杀伤效率高、靶向性好和适用性广的新型免疫疗法,或许可为MSS型CRC的临床试验提供新的方向。



2、溶瘤病毒VG001在MSS型CRC中的复制与杀伤



3、VG001在小鼠MSS型CRC肿瘤模型中的抗肿瘤效果



4、VG001在CT-26肿瘤模型中的免疫机制
 


1) 使用BD FACSCelesta™流式细胞分析仪检测VG001瘤内注射后的免疫浸润情况:




2)分析结果: